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技術(shù)服務(wù)建設(shè)

偽狂犬變異株的研究進(jìn)展及防控經(jīng)驗(yàn)

【 發(fā)布時(shí)間：2016-04-30 】 【 點(diǎn)擊次數(shù)：55 】 【 所屬分類：技術(shù)服務(wù)建設(shè)】

         一、PRV變異株的發(fā)現(xiàn)
        1902年  Aujeszky首次將其與狂犬病相區(qū)別作為一種獨(dú)立疾病，始稱Aujeszky’s disease(AD), 后稱偽狂犬病。1910年  Schmiedhoffer 發(fā)現(xiàn)致病因子是病毒, 稱為pseudorabies virus（PrV），有的沿稱Aujeszky’s disease virus（ADV）。1933年  Traub用兔腦、睪丸組織體外培養(yǎng)PrV獲成功。1934年  Sabin and Wright將PrV劃歸皰疹病毒群。1995年  ICTV第六次報(bào)告列入皰疹病毒科a-皰疹病毒亞科水痘病毒屬，分類學(xué)名豬皰疹病毒I型。PRV只有一個(gè)血清型。
        豬偽狂犬病病毒宿主
        體內(nèi)宿主：腦、心、肝、脾、肺、腎、扁桃體，神經(jīng)節(jié)，公豬精囊中
        潛伏感染：主要在神經(jīng)節(jié)中
        犬、貓、兔、牛、羊、鼠、均是致死性感染。豬最具耐受性，是自然界病毒唯一的貯存宿主。一旦感染終帶毒，潛伏感染不表現(xiàn)癥狀，表現(xiàn)癥狀到死亡時(shí)間極短。
        豬偽狂犬病危害
        妊娠母豬：流產(chǎn)、死胎、木乃伊為特征的繁殖障礙
        哺乳仔豬：高熱、嘔吐、腹瀉、神經(jīng)癥狀，死亡高率達(dá)100%
        成 年 豬：癥狀輕微，一過性發(fā)熱，影響增重
        公    豬：睪丸鞘膜炎，精子質(zhì)量下降
        母    豬：返情率高、屢配不孕
        斷奶仔豬：神經(jīng)癥狀，拉稀，嘔吐，偶有死亡
        我國(guó)1980年前后的偽狂犬的流行情況
        在14個(gè)省，三個(gè)自治區(qū)，一個(gè)直轄市流行。通過牛羊等間接接觸傳播。1980年后，隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大迅速傳播。發(fā)病豬場(chǎng)死亡率達(dá)到70-100%。
        2011年前我國(guó)目前偽狂犬病流行特點(diǎn)
        由于疫苗普遍接種并配合鑒別診斷技術(shù)臨床典型病例已較少。很多規(guī)模化豬場(chǎng)偽狂犬病基本達(dá)到凈化。
        2012年偽狂犬變異株的發(fā)病情況
        以母豬流產(chǎn)、死胎、為主；仔豬出生后3-5天神經(jīng)癥狀，腹瀉、嘔吐，死亡率100%；偽狂犬野毒抗體呈陰性豬場(chǎng)，迅速轉(zhuǎn)陽(yáng)，一個(gè)月內(nèi)gE抗體陽(yáng)率超過80%。
        至2015年偽狂犬變異株的感染情況
        初次感染場(chǎng)特別是野毒抗體陰性場(chǎng)，損失慘重;初產(chǎn)母豬以流產(chǎn)，神經(jīng)癥狀為主；感染后1年產(chǎn)房逐漸平穩(wěn)；神經(jīng)癥狀比例減少；腹瀉比例增高；仔豬野毒抗體陽(yáng)性率高（大部分為母源抗體）育肥豬發(fā)燒、咳喘問題突出，散毒嚴(yán)重，最終影響產(chǎn)房；公豬精液帶毒嚴(yán)重。
        原因：
        1、偽狂犬母源抗體的持續(xù)期長(zhǎng)
        2、現(xiàn)有免疫程序不能保護(hù)至育肥期
        二、變異株偽狂犬變異在哪里？
        基因組多處改變，存在多個(gè)氨基酸插入位點(diǎn)，導(dǎo)致抗原性較大改變；歐美國(guó)家毒株主要為基因I型，亞洲國(guó)家毒株主要為基因II型。我國(guó)PRV毒株以基因II型為主，而Bartha疫苗為基因I型，我國(guó)早期毒株雙城株（S株，偽狂犬疫苗攻毒保護(hù)校檢毒株）的基因組骨架為基因II型，其UL區(qū)的部分片段來自于基因I型。
        現(xiàn)有疫苗對(duì)變異株的攻毒保護(hù)效果
 
        不同偽狂犬疫病苗毒株對(duì)變異株株攻毒后的保護(hù)結(jié)果
 
        2011年以來，出現(xiàn)了一種變異株的偽狂犬病毒，該病毒與經(jīng)典毒株有顯著差異；變異株的毒力更強(qiáng)，更容易致死仔豬。該毒株目前是優(yōu)勢(shì)毒株；原有的免疫程序?qū)ψ儺愔瓯Ｗo(hù)效果一般。
        三、偽狂犬變異株的防控經(jīng)驗(yàn)
        陽(yáng)性母豬可產(chǎn)陰性仔豬
        免疫頻次
        公豬
        中和抗體
        滅活疫苗
        活疫苗
        1、偽狂犬的周期性檢測(cè)
        重視公豬的偽狂犬抗原檢測(cè)
        ---精液生殖道散毒，疫苗免疫不起作用
         步驟及建議程序：
        先對(duì)公豬采血檢測(cè)gE抗體；野毒抗體呈陽(yáng)性的，進(jìn)行精液病原檢測(cè)（注：只要偽狂犬野毒未感染精囊，通過加大免疫頻次，可壓制病原在體內(nèi)傳播）定期采集精液進(jìn)行抗原檢測(cè)，建議每季度一次，精液中有偽狂犬野毒病原，公豬必需淘汰；補(bǔ)充野毒抗體為陰性的公豬后備。
        母豬按胎次采樣檢測(cè)
        抗體檢測(cè)初次采樣比例20%，胎次為配種、配種一次，配種2次，3-4次，5-6次。
        抗體檢測(cè)野毒陽(yáng)性率判定病原感染的來源；中和抗體檢測(cè)，特別評(píng)價(jià)對(duì)初產(chǎn)母豬的免疫保護(hù)效果（如果群體未感染野毒，針對(duì)野毒的中和抗體滴度>1:80；如果感染過野毒中和抗體滴度要高于1:400，注中和抗體針對(duì)batha-K61）臍帶病原檢測(cè)---判斷野毒垂直傳播比例，臍帶檢出野毒母豬三個(gè)月內(nèi)           不適宜配種；口腔分泌液、鼻試子檢測(cè)，判斷群體散毒載量，評(píng)價(jià)疫苗免疫程序。
        仔豬檢測(cè)---野毒陽(yáng)性母豬可以產(chǎn)抗原與抗體雙陰性的仔豬
        注意：90日齡之前仔豬體內(nèi)的抗體主要為母源抗體，陽(yáng)性豬場(chǎng)90日齡之前的抗體檢測(cè)沒有意義；抗體采樣分布---按日齡采樣，主要目的是評(píng)價(jià)感染發(fā)生的時(shí)間；采樣分布：30日齡，60日齡，90日齡，120日齡和150日齡（注：野毒陽(yáng)性場(chǎng)，母豬群體的野毒陽(yáng)性率>50%，仔豬采集90日齡之后的血清）；在野毒抗體陽(yáng)性比例開始上升前一個(gè)月加強(qiáng)免疫；有神經(jīng)癥狀死亡的仔豬要立即送檢。
        2、生物安全措施
        原因：感染豬是生物反應(yīng)器，不斷散毒，是豬場(chǎng)野毒重要的傳染源
        ①重視育肥期豬群散毒問題，育肥舍飼養(yǎng)員嚴(yán)進(jìn)產(chǎn)房
        ②死淘
        有神經(jīng)癥狀的仔豬立即死淘
        公豬精液排毒，垂直傳播影響精液質(zhì)量，盡量淘汰
        ③滅鼠工作
        鼠患不除，偽狂不止
        3、免疫措施
        經(jīng)典株疫苗免疫仔豬基本方案：
        1日齡滴鼻，5.0-5.5左右
        5-7周首次肌注免疫5.8-6.0（參照母源抗體滴度）
        10周左右二次肌注5.8-6.0
        120-140日齡日齡時(shí)再次加強(qiáng)5.8-6.0
        緊急免疫劑量：肌注106.0TCID50
        1、偽狂犬細(xì)胞免疫發(fā)揮更大的作用，頻次的作用高于劑量；
        2、前期考慮中和抗體的作用，滴鼻免疫不受母源抗體干擾；
        3、滴鼻激活的黏膜免疫，占位三叉神經(jīng)節(jié)（主要是TK基因的作用）
        4、滴鼻可以切斷哺乳期病原的水平傳播
        首免日齡參考---疫苗母源抗體持續(xù)時(shí)間
 
        母豬免疫
        次數(shù)：普免4次/年
        免疫劑量：106.0TCID50/次
        免疫方式：肌肉注射
        注意事項(xiàng)：
        配種前一個(gè)月加強(qiáng)免疫一次
        配種后一個(gè)月和產(chǎn)前15天不能用苗
        產(chǎn)前一個(gè)月可做跟胎免疫一次
        后備母豬及后備公豬免疫
        免疫次數(shù)：普免4次/年
        免疫劑量：106.0TCID50 /次
        免疫方式：肌肉注射
        注意事項(xiàng)：
        后備母豬及公豬必需經(jīng)過檢測(cè)無野毒感染后才可作為種豬使用
        后備母豬配種前2個(gè)月免疫一次，配種前1個(gè)月加強(qiáng)免疫一次
        配種后一個(gè)月和產(chǎn)前15天不能用苗
        產(chǎn)前一個(gè)月可做跟胎免疫一次
        滅活苗的作用：
        1、gE基因敲除的變異株的滅活苗
        目前在申報(bào)和臨床的
        田克恭、童光志、姜平等
        2、已有結(jié)論
      （1）滅活苗可有效阻止發(fā)病，但不能有效阻止病原通過呼吸道感染
      （2）不能阻止野毒抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)
      （3）可顯著改善豬群的感染壓力
        rPRV-gE--EGFP+（HeN1）——佐劑的選擇及免疫效果評(píng)價(jià)
        佐劑種類：水佐劑、油佐劑
        成品中病毒含量：106.0TCID50/mL
        免疫動(dòng)物：Balb/c小鼠，5周齡，雄性
        免疫劑量及方式：皮下注射0.3mL/只，免疫兩次，間隔兩周
        攻毒：HeN1 F5代，50LD50/只，皮下注射
 
        變異株活疫苗的研究
        通過敲除TK和gE基因后，偽狂犬毒力顯著降低
        安全性和有效性
        大群試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)返祖和基因重組現(xiàn)象
        經(jīng)過大群試驗(yàn)，有效降低偽狂犬的臨床發(fā)病率
        偽狂犬溫和凈化方案要點(diǎn)
        生物安全---滅鼠和消毒，降低水平傳播途徑
        嚴(yán)格的公豬篩選
        疫苗免疫頻次高-壓制野毒散播
        免疫程序需要檢測(cè)數(shù)據(jù)參考
        母豬隨產(chǎn)次自然淘汰
        補(bǔ)充陰性后備
        免疫程序：嚴(yán)重場(chǎng)可考慮變異株的滅活苗和活苗壓制
        周期：2-3年
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